细胞房细胞培养时可能的主要污染源有三类：化学污染、细胞交叉污染和微生物污染。化学污染和细胞交叉污染在细胞培养过程中发生率低。细胞交叉污染也通常只在同一时期内进行多种细胞培养时可能会出情况。最常见的则是微生物污染。如何有效的控制微生物污染，是细胞房细胞培养的重要问题。

造成细胞污染的常见微生物种类有细菌、真菌和支原体。

 细菌污染：

细菌是一种原核细胞微生物，常见的细菌污染主要由大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞 菌、葡萄球菌等引起。 通常在发生细菌污染后，培养基会变浑浊，pH 会变低，细胞的生长被抑制，甚至死亡。 在 10×物镜下可观察到细胞间的空隙有点 状颗粒。

真菌污染：

真菌是一种真核细胞微生物，个体比细菌大。污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛 霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。被真菌污染后，培养基 pH 会发生改变， 表面可出现肉眼可见的、白色或浅黄色漂浮物。在光学显微镜下可观察到细 胞间有纵横交错的丝状或树枝状菌丝。被酵母菌污染后，培养液亦会发生浑浊，但 pH 变化不大，酵母菌呈独立的圆形或卵形颗粒， 分散在细胞周围生 长。 被念珠菌污染的培养液则依然清亮，念珠菌呈 链状生长。真菌喜温暖潮湿的环境，故细胞培养箱、水浴锅等系统都是真菌生长的温床，是潜在的污染途径。

支原体污染：

支原体，曾被称为类胸膜肺炎微生物，是为目前发现的最小、最简单的原核生物。支原体没有固定的形态，多呈球形。 支原体没有细胞壁，通过吸取宿主的营养物和甾醇类物质进行生长 和维持细胞形态。支原体污染是一个困扰大多数实 验室的问题。 支原体的大小为 0.1~0.3μm，光学显微镜下不易观察到，可穿过绝大部分的滤膜，并且因其没有细胞壁， 作用于细胞壁的抗生素对它无 效。支原体生长缓慢，培养基无特殊的外在表现，但 它对宿主细胞的表达、功能、生长、胞内细胞器、代 谢等方面都会产生深远影响[8]。 在培养过程中若发现细胞增殖减慢、 饱和密度下降或发生破碎时，可怀疑是支原体的污染。   

污染途径及对应的控制措施细胞一旦发生污染，不仅影响实验结果，而且浪费人力、物力和时间。保持无菌，无论对于新人还 是老手，都是一个巨大的挑战。 体外培养的细胞缺乏免疫系统，自体不能清除污染物，因此控制污染最佳方式就是预防污染。

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